发布时间:2020-05-07
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增强型转染试剂是在前几代转染试剂的基础上再次创新,包含最为先进的脂质体纳米颗粒技术,追求更优越的转染性能。增强型转染试剂具有更好的转染效率,并提高细胞活性,适用于较难转染及常见细胞的转染。
操作步骤:(以六孔板的贴壁细胞DNA转染为例)
1. 细胞准备。转染前一天将细胞接种至六孔板内,细胞接种数量视其生长速度和细 6 胞系类型而定,一般为0.5-1×10 个细胞。转染时要求细胞生长的汇合度为70~90%,转 染前两小时对细胞进行换液。(细胞状态与转染效果影响很大,选择最佳的细胞状态更有利于转染效率提高和转染后细胞状态的恢复);
2. 将3.75?l和7.5?l的RZ523-Lipo增强转染试剂分别加至另外125?l无血清的OPTI-MEM培养基中,轻轻混匀,室温静置2-3分钟;
3. 将5?g质粒DNA (0.5-5?g/?L) 加入到250?l无血清OPTI-MEM培养基稀释,制备DNA 预混液匀,然后添加10 ?l RZ523-Lipo辅助试剂并充分混匀;
4. 在每管已稀释的RZ523-Lipo增强转染试剂中加入等体积稀释的 DNA孵育10-15分钟;
5.将DNA和RZ523-Lipo增强转染试剂混合液滴加至六孔板的孔内,前后左右晃动孔板混匀,置于培养箱中培养;
6.转染18-48小时后,倒置荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,或加入抗性培养基筛选稳定表达细胞系单克隆。
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