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标签抗体:基因表达与蛋白功能研究的得力助手

发布时间:2024-11-13

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标签抗体由两部分组成:蛋白标签和目的蛋白。蛋白标签是利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或蛋白。这些标签通常是一段特定的氨基酸序列,它们对目的蛋白的功能影响极。芄桓秤枞诤系鞍滓恍┬碌奶匦,如易于纯化、检测和示踪等。标签抗体的合成正是基于抗原-抗体反应原理,这些抗体能够高度特异地结合对应的标签融合蛋白。

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常见蛋白标签及其应用

His标签:由六个组氨酸残基(HHHHHH)组成的短肽,被认为是蛋白纯化的优先标签。His标签分子量极。ㄔ0.84KD),可插入在目的蛋白的C末端或N末端。其侧链与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),实现重组蛋白的分离纯化。His标签具有操作简便、对目的蛋白特性影响小、免疫原性低等优点。

Flag标签:由八个氨基酸(DYKDDDDK)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的免疫吸附纯化。Flag标签结构短。矣肴诤系鞍字手浜幸桓龀っ盖懈钗坏悖梢酝üっ盖懈畋怀。Flag标签具有抗原肽编码简单、纯化效率高、不影响融合蛋白活性等优点。

GST标签:GST标签蛋白本身是一个在调解过程中起到重要作用的转移酶,天然大小为26KD。GST融合表达系统广阔应用于各种融合蛋白的表达,可在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。GST标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性,同时便于使用酶学分析或免疫分析进行检测。

Avi-Tag:一个15个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点,可用于蛋白质分离纯化和蛋白质相互作用研究。Avi-Tag对蛋白空间结构的影响非常。夜潭ɑ腁vi-Tag标签融合蛋白应用范围广。

c-Myc标签:其序列为EQKLISEEDL,可识别其相应的抗体,应用于Western-blot杂交技术、免疫沉淀和细胞流式术中,用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。但需注意,Myc标签蛋白本身即为人的Myc基因的一部分,在应用于人的细胞或组织相关实验时应避免。

标签抗体在研究中的作用

蛋白纯化:标签抗体能够特异性地结合标签融合蛋白,从而实现高效的蛋白纯化。例如,His标签抗体可用于基于IMAC的蛋白纯化,Flag标签抗体则可用于亲和层析纯化。

蛋白检测:标签抗体可用于检测融合蛋白的表达水平、细胞内定位等。通过Western blot、免疫荧光等技术,研究人员可以直观地观察到目标蛋白的表达情况。

蛋白功能研究:标签抗体在蛋白功能研究中发挥着重要作用。例如,通过免疫沉淀技术,研究人员可以富集和纯化与目标蛋白相互作用的蛋白,进而揭示其相互作用网络和功能机制。

信号转导研究:标签抗体还可用于信号转导研究,通过检测标签融合蛋白的表达和活性变化,揭示信号转导途径的调控机制。

综上所述,标签抗体作为基因表达、蛋白功能及信号转导研究中的常用工具,具有效高、特异、简便等优点。随着技术的不断发展,越来越多的蛋白标签和抗体被开发出来,为科学研究提供了更加丰富的选择。

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